现代人类精子冷冻：对 DNA、染色质和顶体完整性的影响

精子冷冻中玻璃化冷冻方法的出现以及除蒸汽快速冷冻之外固体表面玻璃化冷冻的引入，为帮助不孕不育中心开辟了一种简单、安全的方法。虽然冷冻保存对精子活力、形态和活力的影响已有记录，但不同方法冷冻和解冻后精子 DNA、染色质和顶体完整性可能发生改变的问题仍然存在争议。

材料和方法： 正常样本根据WHO严格标准采集。将精子悬浮液与 0.5 M 蔗糖按 1:1 混合，并分成四等份进行冷冻：新鲜、氮气直接浸没玻璃化 (Vit)、固体表面玻璃化 (SSV) 和蒸气 (Vapour)。将精子悬浮液转移至0.25ml无菌塑料中。然后将吸管插入0.5毫升吸管内。为了解冻，将吸管浸入 42°C 水浴中。除了精子参数之外，我们还通过双染评估顶体反应，通过甲苯胺蓝 (Tb) 和染色霉素 A3 (CMA3) 评估染色质完整性，并通过末端脱氧核苷酸转移酶 dUTP 缺口末端标记 (TUNEL) 评估 DNA 完整性。

结果： 在渐进运动中，Vit 发生率最高（39.9 ± 13.3）。此外，不动精子率最低的是Vit（32.7±16.3）。在正常形态上，组内Vit与新鲜相似，而SSV和Vapor与新鲜有显着差异。Vit 组中发生顶体反应的精子百分比 (81.3 ± 10.2) 高于新鲜组。TUNEL+ 结果表明，Vit 中 DNA 片段化显着增加（p 值 = 0.025）。而在 SSV 和 Vapor 中，结果与新鲜的相当。TUNEL+ 与正常形态、TB、CMA3 和完整顶体的存在之间存在显着相关性。

结论： 蒸气中的精子在 DNA、染色质和顶体完整性方面更健康。与较高的运动性和正常的形态形成对比；Vit 中的 DNA、染色质和顶体完整性均降低。然而，这些发现在 SSV 或 Vapour 中更容易被接受。